LC液相色譜儀適用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩定易分解的、分子量大、極性不同的有機化合物;生物活性物質(zhì)和多種天然產(chǎn)物;合成和天然的高分子化合物等。在自然界中,80%的有機物都可以用液相色譜系統進(jìn)行分析和檢測。LC液相色譜儀系統主要應用于食品安全、藥物分析、環(huán)境保護以及衛生防疫、農業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)、畜牧業(yè)、制造業(yè)、石油化工、質(zhì)量監督、教學(xué)研究、水利系統等領(lǐng)域。
LC液相色譜儀系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，LC液相色譜儀被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出，通過(guò)檢測器時(shí)，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來(lái)液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。
使用LC液相色譜儀時(shí)，液體待檢測物被注入色譜柱，通過(guò)壓力在固定相中移動(dòng)，由于被測物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同，不同的物質(zhì)順序離開(kāi)色譜柱，通過(guò)檢測器得到不同的峰信號，zui后通過(guò)分析比對這些信號來(lái)判斷待測物所含有的物質(zhì)。LC液相色譜儀作為一種重要的分析方法，廣泛地應用于化學(xué)和生化分析中。液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒(méi)有本質(zhì)的差別，它的特點(diǎn)是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和微粒固定相，適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機化合物。
LC液相色譜儀的構造
液相色譜系統主要由流動(dòng)相儲液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀組成，其整體組成類(lèi)似于氣相色譜，但是針對其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調整。液相色譜的輸液泵要求輸液量恒定平穩，進(jìn)樣系統要求進(jìn)樣便利、切換嚴密。同時(shí)，由于液體流動(dòng)相黏度遠遠高于氣體，為了減低柱壓，液相色譜的色譜柱一般比較粗，長(cháng)度也遠小于氣相色譜柱。
液相色譜應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。
LC液相色譜儀它包括空柱和填料?？罩莾缺趻伖獾牟讳P鋼管，內徑為4～5mm，長(cháng)100～250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中，用柱式機械往復泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相。
等基線(xiàn)平直后可用苯、萘、菲的混合試液，用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇：水(83：17)為流動(dòng)相測定柱效及分離度塔板數在2～3萬(wàn)/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好。為防止柱污染，常用1個(gè)50mm長(cháng)，4~5mm內徑，裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護柱(預柱)接在主柱之前，以延長(cháng)色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng)，以洗去鹽類(lèi)、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。
流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中，經(jīng)過(guò)有濾過(guò)頭、內徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱，zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法，即自洗脫開(kāi)始到結束，溶劑的配比恒定。
另一類(lèi)為梯度洗脫法,即使溶劑的極性強度在色譜過(guò)程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過(guò)程中很好分離，而整個(gè)色譜過(guò)程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中。
檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線(xiàn)吸收，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測器應用于對紫外光有吸收的藥物，大多數藥物分子對紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長(cháng)型、可變波長(cháng)型及掃描器，既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測，又能提高測定靈敏度，重現性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。
電化學(xué)檢測器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類(lèi)及有酚類(lèi)基團的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流，放大后檢測，檢測限pg級。
數據處理現代液相色譜儀帶有數據處理系統，除記錄譜外，還能自動(dòng)記錄峰的保留時(shí)間，能自動(dòng)積分求算峰面積，并能按照預定的程序作有關(guān)計算，報告分析結果。
