LC液相色譜儀不適用于溫度環(huán)境。通常，操作要求可在室溫5至35°C下滿(mǎn)足。通常，濕度環(huán)境需要為20％至85％。在高濕度區域，當使用某些類(lèi)型的氣相色譜儀時(shí)，由于高環(huán)境濕度，氣相色譜儀的絕緣性能會(huì )降低，如果操作靈敏度高，響應值會(huì )降低。使用氣相色譜儀時(shí)，工作人員在遇到上述現象時(shí)應采取必要措施。
LC液相色譜儀系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，LC液相色譜儀被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出，通過(guò)檢測器時(shí)，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來(lái)液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。
選擇LC液相色譜儀入口和檢測器類(lèi)型的色譜柱尺寸和墊片材料；避免氣相色譜儀重復使用墊圈；使用合適的柱切割工具（如陶瓷板或金剛石切割刀）進(jìn)行柱切割；在將氣相色譜儀色譜柱安裝在進(jìn)樣口和檢測器中之前，確保色譜柱頭清潔平整；安裝氣相色譜儀制造商的要求，將色譜柱安裝插入入口和檢測器的適當距離；氣相色譜儀色譜柱必須放在色譜柱上，毛細管色譜柱的任何部分都不能接觸色譜柱的壁；確?？鞠浼訜崆八薪宇^都沒(méi)有泄漏，載氣中不含氧氣；通過(guò)注射檢查L(cháng)C液相色譜儀色譜柱是否正確安裝，無(wú)需保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序，并設定載氣的線(xiàn)性流速。
LC液相色譜儀的使用方法的具體步驟
1、LC液相色譜儀它包括空柱和填料?？罩莾缺趻伖獾牟讳P鋼管，內徑為4～5mm，長(cháng)100～250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中，用柱式機械往復泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相。
等基線(xiàn)平直后可用苯、萘、菲的混合試液，用正己烷（含 0.05%甲醇）或甲醇：水（83：17）為流動(dòng)相測定柱效及分離度塔板數在2～3萬(wàn)/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好。為防止柱污染，常用1個(gè)50mm長(cháng)，4~5mm內徑，裝有硅膠（40-50mm）或立柱相同填料的保護柱（預柱）接在主柱之前，以延長(cháng)色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng)，以洗去鹽類(lèi)、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。
2、流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中，經(jīng)過(guò)有濾過(guò)頭、內徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱，zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法，即自洗脫開(kāi)始到結束，溶劑的配比恒定。
另一類(lèi)為梯度洗脫法，即使溶劑的極性強度在色譜過(guò)程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過(guò)程中很好分離，而整個(gè)色譜過(guò)程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中。
3、檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線(xiàn)吸收，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測器應用于對紫外光有吸收的藥物，大多數藥物分子對紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長(cháng)型、可變波長(cháng)型及掃描器，既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測，又能提高測定靈敏度，重現性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。
80年代應用激光替代氙燈光源，光強度增加了3~4倍，對某些藥物的檢測限可達pg級。電化學(xué)檢測器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類(lèi)及有酚類(lèi)基團的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流，放大后檢測，檢測限pg級。
4、數據處理現代液相色譜儀帶有數據處理系統，除記錄譜外，還能自動(dòng)記錄峰的保留時(shí)間，能自動(dòng)積分求算峰面積，并能按照預定的程序作有關(guān)計算，報告分析結果。
LC液相色譜儀的要求
1、流動(dòng)相必須用HPLC級的試劑，使用前過(guò)濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)（使用0.45μm或更細的膜過(guò)濾）。
2、流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。
3、不能用純乙腈作為流動(dòng)相，這樣會(huì )使單向閥粘住而導致泵不進(jìn)液。
4、使用緩沖溶液時(shí)，做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí)，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
5、長(cháng)時(shí)間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相（如，甲醇等），因為，純水易長(cháng)霉。
6、LC液相色譜儀每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。
7、C18柱不能進(jìn)蛋白樣品，血樣、生物樣品。
8、堵塞導致壓力太大，按預柱→混合器中的過(guò)濾器→管路過(guò)濾器→單向閥檢查并清洗，清洗方法：
?、僖援惐甲魅軇_洗；
?、诜旁诋惐贾虚g用超聲波清洗；
?、塾?0％稀硝酸清洗；
9、氣泡會(huì )致使壓力不穩，重現性差，所以在使用過(guò)程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
10、如果進(jìn)液管內不進(jìn)液體時(shí)，LC液相色譜儀要使用注射器吸液：通常在輸液前要進(jìn)行流動(dòng)相的清洗。
11、LC液相色譜儀要注意柱子的pH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。
12、更換流動(dòng)相時(shí)應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動(dòng)邊靖洗，然后插入新的流動(dòng)相中。更換無(wú)互溶性的流動(dòng)相時(shí)要用異丙醇過(guò)渡一下。
