液相色譜儀采用技術(shù)工作原理哪些？

 

    與試樣預處理技術(shù)相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著(zhù)固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。

 

    液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內， 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數， 在兩相中作相對運動(dòng)時(shí)， 經(jīng)過(guò)反復多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程， 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別， 被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出， 通過(guò)檢測器時(shí)， 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來(lái)。

 

    液相色譜法的工作原理是儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出，通過(guò)檢測器時(shí)，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來(lái)。

 

    液相色譜分析法(HPLC)，它的基本概念及理論基礎（如保留值、塔板理論、速率理論、容量因子、分離度等），與氣相色譜 是一致的，但又有不同之處：液相色譜 與氣相色譜的主要區別可歸結于以下幾點(diǎn)：

 

    進(jìn)樣方式的不同：液相色譜只要將樣品制成溶液，而氣相色譜需加熱氣化或裂解；

 

    流動(dòng)相的不同，在被測組分與流動(dòng)相之間、流動(dòng)相與固定相之間都存在著(zhù)一定的相互作用力；

 

    由于液體的粘度較氣體大兩個(gè)數量級，使被測組分在液體流動(dòng)相中的擴散系數比在氣體流動(dòng)相中約小4~5個(gè)數量級；

 

    由于流動(dòng)相的化學(xué)成分可進(jìn)行廣泛選擇，并可配置成二元或多元體系，滿(mǎn)足梯度洗脫的需要，因而提高了液相色譜的分辨率（柱效能）；

 

    液相色譜采用5~10Lm細顆粒固定相，使流體相在色譜柱上滲透性大大縮小，流動(dòng)阻力增大，必須借助高壓泵輸送流動(dòng)相；

 

    液相色譜是在液相中進(jìn)行，對被測組分的檢測，通常采用靈敏的濕法光度檢測器，例如，紫外光度檢測器、示差折光檢測器 、熒光光度檢測器等；

 

    液相色譜與氣相色譜相比較，液相色譜同樣具有高靈敏度、能和高速度的特點(diǎn)。

 

    液相色譜儀的定性和定量分析，與氣相色譜分析相似，在定性分析中，采用保留值定性，或與其他定性能力強的儀器分析 法連用；在定量分析中，采用測量峰面積的歸一化法、內標法或外標法等，但液相色譜在分離復雜組分式樣時(shí)，有些組分常不能出峰，因此歸一化法定量受到限制，而內標法定量則被廣泛使用。