液相色譜儀只需要將樣品制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制。流動(dòng)相選擇范圍廣,固定相種類(lèi)多,可以分離熱不穩定不揮發(fā)、離解不離解、分子量范圍多樣的材料。
結合樣品預處理技術(shù),液相色譜所獲得的高分辨率、高靈敏度,使具有非常相似性質(zhì)的物質(zhì)的分離與同時(shí)測定成為可能,并使復雜相體中痕量組分的分離成為可能。隨著(zhù)固定相的發(fā)展,液相色譜儀有可能在足夠的條件下完成生化物質(zhì)的分離以保持其活性。
液相色譜儀系統由儲液器、泵、采樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀組成。累加器中的流動(dòng)相是高壓泵入系統,樣品溶液進(jìn)入流動(dòng)相,取樣器是流動(dòng)相在色譜柱(固定相),由于各種組件的樣品溶液兩個(gè)階段有不同的分配系數,相對運動(dòng)的兩個(gè)階段,經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程中,組件的分布在移動(dòng)速度上有很大的差異,將分離出的各個(gè)組分從柱狀逸出,通過(guò)檢測器,將樣品濃度轉換成電信號發(fā)送到記錄儀,數據以地圖的形式打印出來(lái)。
液相色譜儀的工作原理是流動(dòng)相在累加器是高壓泵入系統,樣品溶液進(jìn)入流動(dòng)相,取樣器是流動(dòng)相在色譜柱(固定相),由于各種組件的樣品溶液兩個(gè)階段有不同的分配系數,相對運動(dòng)的兩個(gè)階段,經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程中,各組分在移動(dòng)速度上的分布有很大的差異,從逸出的色譜柱中分離出各個(gè)組分,通過(guò)檢測器,將樣品濃度轉換成電信號發(fā)送到記錄儀,數據以地圖的形式打印出來(lái)。
LC液相色譜儀不適合溫度環(huán)境。通常,操作要求可在室溫下為5 ~ 35℃才能滿(mǎn)足。通常,濕度環(huán)境需要在20%到85%之間。在高濕度地區,當使用某些類(lèi)型的氣相色譜儀時(shí),由于環(huán)境濕度高,會(huì )降低氣相色譜儀的絕緣性能,如果操作靈敏度高,響應值會(huì )降低。員工在使用氣相色譜儀時(shí),遇到上述現象應采取必要的措施。
液相色譜儀系統由儲液器、泵、采樣器、柱、檢測器和記錄儀組成。累加器中的流動(dòng)相是高壓泵入系統,樣品溶液進(jìn)入流動(dòng)相,取樣器是流動(dòng)相在色譜柱(固定相),由于各種組件的樣品溶液兩個(gè)階段有不同的分配系數,相對運動(dòng)的兩個(gè)階段,經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程中,組件的分布在移動(dòng)速度上有很大的差異,LC液相色譜儀從色譜柱中分離出單獨的組分,通過(guò)檢測器,將樣品濃度轉換成電信號發(fā)送到記錄儀,數據以圖形的形式打印出來(lái)。液相色譜儀主要包括采樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。
為L(cháng)C液相色譜儀進(jìn)樣口和檢測器類(lèi)型選擇柱尺寸和墊片材料;避免重復使用氣相色譜儀墊片;使用合適的切柱工具(如陶瓷板或金剛石刀)切柱;在氣相色譜柱安裝進(jìn)進(jìn)樣口和檢測器之前,確保色譜柱清潔平整;應制造商要求安裝氣相色譜儀,并在進(jìn)氣口與檢測器之間的適當距離插入色譜柱;氣相色譜柱必須置于色譜柱上,毛細管柱的任何部分不得接觸色譜柱壁。確保烘箱所有接頭在加熱前不漏水,載氣中無(wú)氧;通過(guò)注射檢查L(cháng)C液相色譜柱是否安裝正確,不保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序,并設置載氣的線(xiàn)性流量。
液相色譜儀的要求
1、流動(dòng)相在使用前必須用hplc級試劑進(jìn)行過(guò)濾,以去除顆粒雜質(zhì)和其他物質(zhì)(用0.45 m或更細的膜過(guò)濾)。
2、流動(dòng)相過(guò)濾后,應采用超聲波除氣。脫氣后應在室溫下使用。
3、不能使用純乙腈作為流動(dòng)相,這樣會(huì )使單向閥卡住,導致泵無(wú)法進(jìn)入液體。
4、使用緩沖液時(shí),樣品完成后立即用去離子水沖洗管道和柱1小時(shí),然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,使離子*去除。對于柱塞棒的外部,樣品完成后也必須用20mL以上的去離子水沖洗。
5、長(cháng)時(shí)間不要使用本儀器,柱應取出并用插頭密封保存。注意,由于純水易發(fā)霉,柱體不宜用純水保存,應使用有機相(如甲醇等)保存。
6、液相色譜儀完成樣品后,用樣品中溶解的溶劑清洗取樣器。
7、C18柱不能用于蛋白質(zhì)樣品、血液樣品和生物樣品。
8、如果由于堵塞造成壓力過(guò)高,則在混合器管道過(guò)濾器單向閥中使用預柱過(guò)濾器進(jìn)行檢查和清洗。清洗方法:
9、氣泡會(huì )造成不穩定的壓力和較差的重現性,所以在使用過(guò)程中盡量避免氣泡。
10、如果進(jìn)液管內沒(méi)有液體,LC液相色譜儀應使用注射器吸液:通常在輸液前應清洗流動(dòng)相。
11、液相色譜儀注意液相色譜柱的pH值范圍。不要注入強酸或強堿樣品,特別是堿性樣品。
12、更換移動(dòng)相時(shí),吸濾頭應放置在燒杯內,振動(dòng)時(shí)清洗,然后插入新的移動(dòng)相。非混相流動(dòng)相應改為異丙醇。