LC液相色譜儀系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統,樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,
LC液相色譜儀被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出,通過(guò)檢測器時(shí),樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來(lái)液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統,下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。
LC液相色譜儀的要求
1、流動(dòng)相必須用HPLC級的試劑,使用前過(guò)濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45μm或更細的膜過(guò)濾)。
2、流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波脫氣,脫氣后應該恢復到室溫后使用。
3、不能用純乙腈作為流動(dòng)相,這樣會(huì )使單向閥粘住而導致泵不進(jìn)液。
4、使用緩沖溶液時(shí),做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí),然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對于柱塞桿外部,做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
5、長(cháng)時(shí)間不用儀器,應該將柱子取下用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應該用有機相(如,甲醇等),因為,純水易長(cháng)霉。
6、LC液相色譜儀每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。
7、C18柱不能進(jìn)蛋白樣品,血樣、生物樣品。
8、堵塞導致壓力太大,按預柱→混合器中的過(guò)濾器→管路過(guò)濾器→單向閥檢查并清洗,清洗方法:
①以異丙醇作溶劑沖洗;
②放在異丙醇中間用超聲波清洗;
③用10%稀硝酸清洗;
9、氣泡會(huì )致使壓力不穩,重現性差,所以在使用過(guò)程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
10、如果進(jìn)液管內不進(jìn)液體時(shí),LC液相色譜儀要使用注射器吸液:通常在輸液前要進(jìn)行流動(dòng)相的清洗。
11、要注意柱子的pH值范圍,不得注射強酸強堿的樣品,特別是堿性樣品。
12、更換流動(dòng)相時(shí)應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動(dòng)邊靖洗,然后插入新的流動(dòng)相中。更換無(wú)互溶性的流動(dòng)相時(shí)要用異丙醇過(guò)渡一下。