液相色譜儀廠(chǎng)家只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類(lèi)繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
與試樣預處理技術(shù)相配合,HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著(zhù)固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。
液相色譜儀廠(chǎng)家的系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統,樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內, 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數, 在兩相中作相對運動(dòng)時(shí), 經(jīng)過(guò)反復多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程, 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出, 通過(guò)檢測器時(shí), 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來(lái)。
液相色譜儀廠(chǎng)家的理解
分配系數與組分、流動(dòng)相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數,離子交換色譜法為選擇性系數 (或稱(chēng)交換系數),凝膠色譜法為滲透參數。但一般情況可用分配系數來(lái)表示。
在條件(流動(dòng)相、固定相、溫度和壓力等)一定,樣品濃度很低時(shí)(Cs、Cm很小)時(shí),K只取決于組分的性質(zhì),而與濃度無(wú)關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件,在這種條件下,得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下,隨著(zhù)濃度的增大,K減小,這時(shí)色譜峰為拖尾峰;而有時(shí)隨著(zhù)溶質(zhì)濃度增大,K也增大,這時(shí)色譜峰為前延峰。因此,只有盡可能減少進(jìn)樣量,使組分在柱內濃度降低,K恒定時(shí),才能獲得正常峰。