LC液相色譜儀根據固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)?,F代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統、溫度控制系統、色譜柱、檢測器、信號記錄系統等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較,具有、快速、靈敏等特點(diǎn)。
對高沸點(diǎn)、難氣化合物的混合物通過(guò)色譜柱和淋洗劑并以實(shí)現分離。應用于生物化學(xué)、生物醫學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門(mén)。
LC液相色譜儀根據固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)?,F代液相色譜儀由高壓泵、色譜柱、檢測器、溫度控制系統、進(jìn)樣系統、信號記錄系統和餾分收集器等部分組成。
液相色譜法的工作原理是儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統,樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出,通過(guò)檢測器時(shí),樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來(lái)。
LC液相色譜儀的使用方法的具體步驟
1、色譜柱它包括空柱和填料??罩莾缺趻伖獾牟讳P鋼管,內徑為4~5mm,長(cháng)100~250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中,用柱式機械往復泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相。等基線(xiàn)平直后可用苯、萘、菲的混合試液,用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)為流動(dòng)相測定柱效及分離度塔板數在2~3萬(wàn)/ml以上及分離度在1.5以上者,柱效好。為防止柱污染,常用1個(gè) 50mm長(cháng),4~5mm內徑,裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護柱(預柱)接在主柱之前,以延長(cháng)色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng),以洗去鹽類(lèi)、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚,再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。
2、流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中,經(jīng)過(guò)有濾過(guò)頭、內徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法,即自洗脫開(kāi)始到結束,溶劑的配比恒定。另一類(lèi)為梯度洗脫法,即使溶劑的極性強度在色譜過(guò)程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過(guò)程中很好分離,而整個(gè)色譜過(guò)程縮短。必須注意,梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中。
3、LC液相色譜儀適用于血藥濃度的檢測器有紫外線(xiàn)吸收,熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測器應用于對紫外光有吸收的藥物,大多數藥物分子對紫外光有吸收,故能較普遍采用,檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長(cháng)型、可變波長(cháng)型及掃描器,既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測,又能提高測定靈敏度,重現性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。80年代應用激光替代氙燈光源,光強度增加了3~4倍,對某些藥物的檢測限可達pg級。電化學(xué)檢測器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類(lèi)及有酚類(lèi)基團的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池,在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流,放大后檢測,檢測限pg級。
4、數據處理現代LC液相色譜儀帶有數據處理系統,除記錄譜外,還能自動(dòng)記錄峰的保留時(shí)間,能自動(dòng)積分求算峰面積,并能按照預定的程序作有關(guān)計算,報告分析結果。